免费发布

古典猪瘟病毒PCR检测试剂盒

更新时间:2015-05-28 10:23:37 信息编号:187315
古典猪瘟病毒PCR检测试剂盒
供应商:
上海古朵生物科技有限公司 商铺
企业认证
所在地
上海市奉贤区庄行镇大叶公路2058弄18号1幢142室
销售经理
洛经理
手机号
18321664727
访问统计
259次
让卖家联系我

详细

产品名称:古典猪瘟病毒pcr检测试剂盒

产品编号:btn29093

产品规格:50t

产品保存:-20℃

pcr反应的影响因素:

退 火温度与时间:退火温度决定pcr特异性与产量。温度高特异性强,但过高则引物不能与模板牢固结合,dna扩增效率下降;温度低产量高,但过低可造成引物 与模板错配,非特异性产物增加。合适的退火温度一般在45~68℃之间。设置特定反应的最适退火温度,可根据引物的(g+c)%含量进行推测,一般实验中 退火温度比扩增引物的熔解温度tm低5℃,退火时间一般为30~60秒,足以使引往返与模板之间完全结合,长时间退火没有必要。

引 物:引物与模板配对的长度应到少为17个核苷酸,最高不宜超过30个核苷酸,最佳长度为20~24个核苷酸,如需插入酶切位点,应在酶切位点5’端多加几 个碱基,有利于酶切。引物的(g+c)%含量组成应均匀,尽量避免含有相同的碱基多聚体。两个引物中(g+c)%含量应尽量相似。引物内部应避免形成明显 的次级结构,如发夹结构。两个引物之间不应发生互补,特别是在引物3’端。如果可能,引物3’端最好富有gc,这样退火后有利于引物3’端的延伸。人工合 成的引物最好经验丰富色谱层析或page纯化,以除去未能合成至全长的短链等杂质。引物的终尝试一般为0.1-2 μm左右,尝试太高会导致非特异性扩增,太低则扩增产物太少。

酶量:50 μl反应体系可用0.5-5 u酶,酶量的选择与模板dna的量,扩增片段大小等有关,酶量过多易发生非特异性反应,而且可能增加突变的机率,尤其在进行高保真扩增时,应尽量减少酶量,但酶量过少时反应性能下降。

模 板:模板可以是单链dna,也可以是双链dna,质粒dna的扩增效率略低于线状dna。模板加量一般不需太多,不超过1 μg为宜,因为加量过多可能导致非特异性扩增增加,但是要考虑模板中靶序列的含量。例如,使用基因组为模板扩增单拷贝或低拷贝靶序列,就需要适当加大模板 用量。

变 性温度与时间:模板变性温度是决定pcr反应中双链dna解链的温度,达不到变性温度就不会产生单链dna模板,pcr也就不会启动。变性温度低则变性不 完全,dna双链会很快复性,因而减少产量。变性温度太高,又会影响酶的活性。一般情况下可设为94℃ 20~30秒,高温时间应昼缩短,以保持耐热dna聚合酶的活力,最高变性温度不宜超过95℃。

延 伸温度与时间:pcr反应的延伸温度一般选择在70~75℃之间,延伸时间根据所用聚合酶扩增速度和扩增片段大小设定,如同样扩增2 kb片段,若使用taq酶只需1分钟,使用pfu酶则应设定2分钟以上。延伸时间过长会导致非特异性扩增带的出现,时间太短则可能得不到扩增产物或得到一 些短的非特异性片段。

循环次数:可根据模板dna的量、扩增片段的大小和扩增产物的下步应用等因互,设定20-40个循环。循环次数太少,扩增量不足,如果循环次数太多,错配几率会增加,非特异性背景严重。所以,在保证产物得率前提下,应尽量减少循环次数。


关于上海古朵生物科技有限公司商铺首页 | 更多产品 | 更多新闻 | 联系方式 | 黄页介绍
主要经营:生化试剂,科研试剂,ELISA试剂盒等等

上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品,励志研发和销售的综合性生物公司,产品远销多个国家和地区,我们将一如既 往地秉承“一切为了满足客户的需求”的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向,不断开发高质量的新产品,提供客户满意的综合服务质量” 的方针。18321664727

...
内容声明:顺企网为第三方交易平台及互联网信息服务提供者,顺企网所展示的信息内容系由上海古朵生物科技有限公司经营者发布,其真实性、准确性和合法性均由店铺经营者负责。顺企网提醒您购买前注意谨慎核实,如您对信息有任何疑问的,请在购买前通过电话与商家沟通确认顺企网存在海量企业商铺和供求信息,如您发现店铺内有任何违法/侵权信息,请立即向顺企网举报并提供有效线索。
您可能喜欢
顺企网 | 公司 | 黄页 | 产品 | 采购 | 资讯 | 免费注册 轻松建站
免责声明:本站信息由企业注册和来自工商局网站, 本站完全免费,交易请核实资质,谨防诈骗,如有侵权请联系我们   法律声明  联系顺企网
ICP备案: 粤B2-20160116 / 粤ICP备12079258号 / 互联网药品信息服务资格证:(粤)-经营性-2016-0009 / 粤公网安备 44030702000007号
© 11467.com 顺企网版权所有 发布批发采购信息、查询企业黄页,上顺企网