正确配置高效液相色谱仪流动相的四个要点

更新时间:2019-04-14 14:06:36 信息编号:465246
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正确配置高效液相色谱仪流动相的四个要点

 

高效液相色谱仪的分离原理,主要依靠流动相和固定相对样品的吸附和脱附作用,那正确配置流动相,对于实验数据和分离效果有着至关重要的意义。

 

一、流动相配置注意事项

一般来说,溶剂的混合按体积比(V/V)或重量比(W/W)进行。溶液的体积因温度而变化,所以按重量比混合配置流动相,样品测定的重复性较好,但是操作繁琐,通常多为体积混合。

体积混合有三种方式,例如50%乙腈水溶液:

方式(1):可以用量筒量取乙腈500ml,再量取水500ml,两种液体在瓶内充分摇晃混合。

方式(2):可以先取500ml乙腈到1L容量瓶中然后用水定容。

方式(3):可以先取500ml水到1L容量瓶中然后用乙腈定容。

这三种方式配置得到的流动相组成都是不同的,即使不考虑其他方面因素,保留时间也不会相同。一般情况推荐使用方式(1) 来配置流动相。

 

二、高效液相色谱仪对试剂的要求

试剂如甲醇,乙腈必须为色谱级纯,其他试剂也尽量使用色谱级纯,试剂标签上都会标有色谱级或HPLC等字样。水为超纯水或者直接购买质量有保证的纯净水。

 

三、调节流动相pH值

采用反相色谱法分离弱酸(3≤pKa≤7)或弱碱(7≤pKa≤8)样品时,通过调节流动相的pH值,以抑制样品组分的解离,增加组分在固定相上的保留,并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。

(1)对于弱酸,流动相的pH值越小,组分的k值越大,当pH值远远小于弱酸的pKa值时,弱酸主要以分子形式存在;分析弱酸样品时,通常在流动相中加入少量弱酸,常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和1%醋酸溶液。

(2)对于弱碱,情况相反。分析弱碱样品时,通常在流动相中加入少量弱碱,常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和30mmol/L三乙胺溶液。流动相中加入有机胺可以减弱碱性溶质与残余硅醇基的强相互作用,减轻或消除峰拖尾现象。所以在这种情况下有机胺(如三乙胺)又称为减尾剂或除尾剂。

 

四、含缓冲盐流动相的配制

配置缓冲盐使用的盐试剂也尽量使用色谱级纯,称样要精准,为了达到要求,选用合适量程的天平且每天使用前对天平校正。按要求配置好以后必须通过0.45μm或0.22μm滤膜过滤并超声脱气20min以上。注意:缓冲盐要临用新配。

 

以上是正确配置高效液相色谱仪流动相的四个要点,欢迎交流。



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