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AnnexinV 染色流式检测细胞凋亡样本送检注意事项

更新时间:2022-05-20 01:18:11 信息编号:1943927
AnnexinV 染色流式检测细胞凋亡样本送检注意事项
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1、样本运输:将细胞收集至 1.5ml 离心管,重悬至 1.5ml 无菌 PBS 或无血清培养基中,将离心管插在装有碎冰的保温泡沫盒中,封口送检,或者放入低温冰袋,将样本用卷纸隔开,勿紧挨冰袋放置,特别注意勿用-80 度冰箱取出的冰袋,可能会将样本冻上,造成细胞全部死亡;

2、样品收集:悬浮细胞直接离心收集,并用 PBS 洗涤 1-2 次,贴壁细胞先收集上清中的漂浮细胞,再用胰酶消化培养板中贴壁细胞,注意消化时间不宜过长,合并上清中的细胞与贴壁细胞,如用吸管或移液器吹打细胞时也尽量轻柔,每次的离心建议用水平离心机 300g 离心 5 分钟,每个样本送检细胞数不能低干 10万个,推荐送检细胞数为50万个细胞,建议每批样本多送 1-3 例细胞,用以做空白对照管和单色补偿篙来调节仪器电压补偿条件;

3、干扰荧光:请预先告知细胞本身是否表达荧光蛋白,例如 GFP、RFP 或者mcherry等,如果用药处理,也需告知加入的药物本身是否有荧光特性,并提供药物的激发与发射光谱信息,此种情况请预先与我们协商检测方案,搭配合适的荧光标记Annexin V和死活染料,避免试剂盒中检测所用到的荧光通道与荧光蛋白的冲突,常用凋亡检测组合试剂为Annexin V-FITC/PI, Annexin V-PE/7-AAD, Annexin V-APC/PI, 有些药物如带红色荧光与PI或者7-AAD冲突的话,死活染料需要用FVS系列或者Zombie系列死活染料。

4、检测时限:因此检测需及时收样检测,请一定提前与我们协商好送检时间,以便我们安排合适的取样时间以及检测时间,在开始收样时给我们发送信息,并告知预计需要多长时间收集好细胞。

5、其他注意:请告知消化细胞所用的胰酶是否含有 EDTA,如有必要请大致提供细胞相关的大小结构或者类型相关信息,以及在收集前显微镜下观察的细胞活性情况,以便我们在检测中可以优化仪器条件来检测细胞凋亡情况。

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