Enzymatics T4 DNA连接酶（快速）秋爽价促销

                                                                                                                      胜创生物秋爽价震撼来袭！

                                                                 活动时间：8月15日-9月24日

t4 dna连接酶（快速）

产品描述
t4 dna连接酶催化双螺旋dna或rna的5′磷酸末端基团和3′羟基末端基团之间形成磷酸二酯键。该酶能够有效的连接平末端和黏性末端，同时修复双螺旋dna、rna或dna/rna杂交链中的单链缺口。

蛋白来源
携带克隆的t4 dna连接酶基因的重组大肠杆菌菌株。
组成成分：
10 mm tris-hcl
50 mm kcl
1 mm dtt
0.1 mm edta
50% glycerol
ph 7.5 @ 25°c
随酶提供：
b1010 (2x rapid ligation buffer)
b6030 (10x t4 dna ligase buffer)
2x rapid ligation buffer (b1010):
132mm tris-hci
20 mm mgcl2
2 mm dtt
2 mm atp
15% peg 6000
ph 7.6 @ 25°c
10x t4 dna ligase buffer (b6030):
500mm tris-hci
100 mm mgcl2
50 mm dtt
10 mm atp
ph 7.6 @ 25°c

单位定义
1 unit 被定义为23°c下、30分钟内，在50 µl 1x t4 dna连接酶缓冲液中能够连接50%的具有粘性末端的100 ng dna片段的dna连接酶量。

产品信息
t4 dna ligase (rapid)
part number  l6030-hc-f
concentration  600,000 u/ml
unit size            26,000 u
sds          available on request

产品特性
storage temperature     -25 to -15°c
test                           specification
purity (sds-page)           >99%
specific activity        300,000 u/mg
ss exonuclease      6,000 u <1.0% released
ds exonuclease      6,000 u <1.0% released
ds endonuclease     6,000 u = no conversion
e.coli dna contamination 6,000 u <10 copies

产品要点：
t4 dna连接酶是atp依赖的酶。建议舍弃在-20°c储存一年的反应缓冲液，用新鲜的缓冲液代替以确保最大性能。当把一个嵌入物当做目标靶物：矢量比在2到6之间时，单个嵌入的连接反应是最佳的。6:1以上的比率将会促进多重片段的嵌入，当下降到2:1比率时，将会降低连接效率。
对于有疑问的连接反应或如果dna浓度是未知的，那就有必要将比率多样化并进行多重连接反应。
高浓度的peg将会显著的降低电能细胞的转化效率。为了将电能细胞转化效率最大化，下面给出写推荐的方法：
最好的：在接下来的连接反应中，利用dna净化吸附柱来净化产物，并用50ul的te洗提。dna即准备转化。dna最终被转化的量应该在0.1-10 ng的范围之间。
较好的：在ddh20 或te中稀释连接产物将会降低peg浓度。dna最终被转化的量应该在0.1-10 ng的范围之间。
高浓度的t4 dna连接酶与2x快速连接缓冲液相结合能够显著提高平末端连接的速度和效率，因此不建议有较长的潜伏期（>10分钟），因为长的潜伏期能够显著的降低连接产物的转化效率。为了将正确嵌入或矢量结合的转化效率最大化，建议使用下面的方案。
酶的10x t4 dna连接酶缓冲液不包含peg，并与标准连接反应方案一致，该方案并没指定利用快速的缓冲区规格。

操作说明：
反应体系:
体积                   组分                                 终浓度
10 µl      2x rapid ligation buffer              1x
x µl                vector                                1-10 ng/µl
x µl               insert                                      1-10 ng/µl
1 µl        t4 dna ligase (600 u/ µl)          30 u/µl
x µl            type i water                              n/a
20 µl                                                           总体积
加入以上所有成分于反应管中，吹打混匀，25℃，10min孵育，立即使用pcr洗脱柱进行dna的纯化，洗脱于50ulte或双蒸水存储或者直接进行稀释（稀释比例至少1：10）并进行转化，将0.1-10ng 连接产物转入相应载体的电转或钙转的感受态细胞中。

参考文献
engler, m.j. and richardson, c.c. (1982) p.d. boyer (eds.), the enzymes, 5, pp. 3. san diego: academic press.

适用范围
该产品被研制、生产加工及销售，仅用于体外，不适用于人类和动物注射。

活动将同步于丁香通8.24-9.24秋季促销活动以及科苑商城店铺促销!