细胞毒性试验是一种检测化学物质对人体健康影响的方法,通过检测人体细胞(如肝细胞、神经细胞或免疫细胞)在接触化学物质后的死亡或受损数量,来评估化学物质的毒性。细胞毒性试验是一种重要的安全评估工具,可以帮助确定化学物质对人体健康的影响,并帮助确定其安全剂量和浓度。
细胞毒性试验方法主要有以下几种:
MTT检测法:MTT检测法是利用MTT作为电子接受体,在生物体内脱氢酶的作用下发生还原反应,生成蓝紫色结晶物,这些结晶物在570~650nm波长处有吸收峰,而在490nm波长处无吸收峰,因此可以用570~650nm波长处的光吸收值表示MTT的还原程度,光吸收值越大,说明细胞活力越强。
CCK-8检测法:CCK-8检测法也是一种酶联免疫吸附测定技术,与MTT检测法类似,通过检测还原物来检测细胞活力。
荧光素发光法检测(ATP发光法):ATP是细胞内的能量货币,ATP的含量与细胞数量和细胞活力有关。ATP发光法通过检测ATP的发光量来检测细胞活力。
LDH法检测:LDH是细胞膜完整性的指标,当细胞受到损伤时,LDH会从细胞内释放出来,因此可以通过检测LDH的活性来检测细胞毒性。
细胞毒性试验流程可以分为以下几个步骤:
预实验:收集对数生长期细胞,根据细胞扩增传代时的细胞生长速度同比例计算出细胞生长84小时后汇合度达到****时的细胞铺板密度,然后以之作为中心密度,以1.25倍为梯度,往前/往后各梯度稀释4个密度,种到实验所用类型的细胞板中。
实验:将待测样品按预实验的实际实验过程模拟给药(同比例加入溶媒的培养基),37℃5%CO2培养箱培养72小时后加CCK8试剂,37℃5%CO2孵育1~4小时后测定OD值。
计算细胞存活率:通过CCK8试剂的吸光度值来计算细胞存活率。
判断细胞毒性:根据细胞存活率判断细胞的毒性。