高效液相色谱仪测定氨基酸的含量
1 l--色氨酸含量的测定
1.1 实验仪器与试剂
色氨酸样品，甲醇， sti501液相色谱仪梯度系统，uv501紫外检测器，7725i手动进样阀，n2000色谱工作站，0.03%kh2po4溶液
1.2 hplc色谱分析条件
流动相为0.03%kh2po4溶液（a）-甲醇（b），线性梯度淋洗，流速1.0ml/min，柱温 35℃，检测波长276nm。
流动相 时间（t/min）
5 10 15 20
a（%） 80 90 80 70
b（%） 20 10 20 30
1.3 标准溶液的配制
精密称取色氨酸标准标准品50mg，置100ml容量瓶中，振摇，用流动相溶解到刻度，作为供试品溶液，另取色氨酸样品适量，同法操作。
1.4 标准直线的制作
精密称取色氨酸标准样品适量 ,分别稀释制成每1ml 中含色氨酸50.0、100.0、200.0、400.0、600.0、800.0、1000.0μg 的溶液，注入液相色谱仪，以色氨酸峰面积a为纵坐标，浓度c为横坐标，制作回归标准直线。
1.5 发酵液中样品中色氨酸含量的测定
取发酵液，稀释配制成约 500μg/ ml 的溶液，摇匀，过滤，取25μl进样，在高效液相色谱仪下测量，记录峰值面积，作图。
2 l-精氨酸含量的测定
2.1 实验仪器与试剂
l-精氨酸标准样品，乙腈， sti501液相色谱仪梯度系统，uv501紫外检测器，7725i手动进样阀，n2000色谱工作站，磷酸二氢铵。
ph计，磷酸，
2.2 hplc色谱分析条件
流动相: 以磷酸二氢铵溶液 ( 称取磷酸二氢铵1.15g, 加水800m溶解后, 用磷酸调节ph 值至2.0±0.1, 加水稀释至 1000ml ) - 乙腈为流动相，线性梯度淋洗; 柱温为30℃检测波长为206nm；进样量：25μl。
2.3 标准直线的制作
精密称取精氨酸标准标准品50mg，置100ml 容量瓶中，振摇，用流动相溶解到刻度，作为供试品溶液，另取色氨酸样品适量，同法操作。精密称取精氨酸标准样品适量 ,分别稀释制成每1ml 中含精氨酸50.0、100.0、200.0、400.0、600.0、800.0、1000.0μg 的溶液，注入液相色谱仪，以精氨酸峰面积a为纵坐标，浓度c为横坐标，制作回归标准直线。
2.4 发酵液中样品中精氨酸含量的测定
取发酵液，稀释配制成约 500μg/ ml 的溶液，摇匀，过滤，取25μl 进样，在高效液相色谱仪下测量，记录峰值面积，作图。
3 l-甘氨酸含量的测定
3.1 实验仪器和试剂
乙酸铵溶液；乙腈；l-甘氨酸标准样品； sti501液相色谱仪梯度系统，uv501紫外检测器，7725i手动进样阀，n2000色谱工作站。
3.2 ｈｐｌｃ色谱分析条件
流动相:a为0.02%mol/l乙酸铵溶液（ph=6.5）:b为乙腈，线性梯度淋洗；流速: 110 ml/min ；柱温:30℃；进样量:２0μl。
梯度洗脱表3
流动相 时间（t/min）
10 20 30 40 50 60
a（%） 80 60 40 40 60 80
b（%） 20 40 60 60 40 20
3.3 标准直线的制作
方法同2.2节
3.4 发酵液中样品中甘氨酸含量的测定
方法同2.5节
4 l-甲硫氨酸含量的测定
4.1 实验仪器和试剂
l-甲硫氨酸标准样品；甲醇；醋酸钠； sti501液相色谱仪梯度系统，uv501紫外检测器，7725i手动进样阀，n2000色谱工作站。
4.2 hplc色谱分析条件
流动相: a为甲醇 , b为 50 mmol /l的醋酸钠缓冲溶液;流速1 . 0 ml /min;梯度洗脱见表1，测定波长为 262 nm，柱温为30℃。
梯度洗脱表4
流动相 时间（t/min）
10 20 30 40 50 60
a（%） 30 50 80 85 100 100
b（%） 70 50 20 15 0 0
4.3 标准直线的制作
方法同2.2节
4.4 发酵液中样品中甲硫氨酸含量的测定
方法同2.5节
5 回收率实验
称取甘氨酸标准液50μg/ml分别稀释0、1、2、4、6、8、10倍，每份取1ml，按标准样品处理方法，过滤，测定标准样品中的甘氨酸的含量，计算回收率。
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