根据《中国药典》2020版*四部1143细菌内毒素检查法,对敷料进行细菌内毒素检查需要遵循以下步骤和原则:
一、检查法概述细菌内毒素检查法是利用鲎试剂来检测供试品中细菌内毒素的含量,以判断其是否符合规定。该检查法包括凝胶法和光度测定法两种方法,其中光度测定法又可进一步分为浊度法和显色基质法。
二、检查用水要求细菌内毒素检查用水应符合灭菌注射用水标准,其内毒素含量应小于一定限值,具体为:用于凝胶法时小于0.015EU/ml,用于光度测定法时小于0.005EU/ml。同时,该检查用水应对内毒素试验无干扰作用。
三、鲎试剂的使用鲎试剂是从鲎的血液中提取出的冻干试剂,可以与细菌内毒素发生凝集反应。在使用鲎试剂时,需要注意以下几点:
鲎试剂的灵敏度应与供试品的内毒素**相适应。
鲎试剂在使用前应进行灵敏度复核试验,以确保其有效性。
鲎试剂应与细菌内毒素标准品进行反应,以验证其反应性能。
供试品溶液应在已去除内毒素的容器中配制,所用溶剂、酸碱溶液及缓冲液应不含内毒素和干扰因子。同时,需要确定较大有效稀释倍数(MVD),以确保在不**过此稀释倍数的浓度下进行检测。
五、干扰试验在进行新药的内毒素检查试验前,或无内毒素检查项的品种建立内毒素检查法时,须进行干扰试验。干扰试验的目的是验证供试品是否对细菌内毒素检查产生干扰作用。当鲎试剂、供试品的处方、生产工艺改变或试验环境中发生了任何有可能影响试验结果的变化时,也须重新进行干扰试验。
六、检查步骤根据所选择的检查方法(凝胶法或光度测定法),按照以下步骤进行检查:
凝胶法:
取不同浓度的内毒素标准溶液,分别与等体积的鲎试剂溶液混合,进行反应。
同时设置阴性对照管,加入等体积的细菌内毒素检查用水。
将试管中溶液轻轻混匀后,封闭管口,放入恒温器中保温一定时间。
观察并记录凝胶形成情况,根据凝胶形成情况判断供试品是否符合规定。
光度测定法:
取不同浓度的内毒素标准溶液和供试品溶液,分别与鲎试剂反应。
使用光度计测定反应体系的吸光度或透光率变化。
根据测定结果和标准曲线计算供试品中细菌内毒素的含量。
判断供试品是否符合规定的内毒素**。
若供试品溶液所有平行管的平均内毒素浓度乘以稀释倍数后小于规定的内毒素限值,则判定供试品符合规定。
若凝胶法结果出现争议,除另有规定外,应以凝胶法结果为准。光度测定法结果可作为参考,但同样需遵循相关规定进行判断。
在进行细菌内毒素检查时,应严格遵守无菌操作规范,避免污染和误差。
所使用的器皿和试剂应符合相关规定和标准要求。
在进行干扰试验和结果判断时,应遵循科学、客观、准确的原则进行判断和解读结果。
综上所述,按照《中国药典》2020版*四部1143细菌内毒素检查法对敷料进行细菌内毒素检查需要遵循一系列严格的步骤和原则。通过规范的检查流程和科学的判断方法,可以确保检查结果的准确性和可靠性。