西双版纳地区铁皮石斛及金釵石斛品质的初步研究

西双版纳地区铁皮石斛及金釵石斛品质的初步研究
来源：中国论文下载中心    [ 2010-08-31 08:32:00 ]    作者：赵俊凌，马洁，段立胜  

 

　　【摘要】 目的对比铁皮石斛与其常用替代品在品质方面的差异。方法采用苯酚-硫酸法与重量法，研究对比了西双版纳地区不同来源铁皮石斛及金釵石斛多糖含量及折干率的差异。结果铁皮石斛的多糖含量及折干率分别为20.29%，20.16%，齿瓣石斛为16.93%，18.92%。结论不同栽培类型的铁皮石斛存在品质差异；金釵石斛的野生苗品质优于组培苗。

【关键词】 铁皮石斛；金釵石斛；石斛碱；多糖；折干率

    石斛属(Dendrobium)是兰科中的第二大属，我国有76种(74个种，2个变种)，主要分布于华南及西南地区，有近40种可作药用。石斛作为一种名贵中药被《本草纲目》收录，其有养胃生津、滋阴清热、明目的功能,用于阴伤津亏,口干烦渴,食少干呕,病后虚热,目暗不明等症状。石斛属植物中化学成分较为复杂，其主要有效成分为石斛多糖及生物碱，另外还有酚类、菲类、芪类、倍半萜类及香豆素等［1］。现代药理实验证明，它们具有抗肿瘤、免疫调节、抗氧化、抗血小板聚集、扩张血管、降低血糖等多种活性［2，3］，同时在治疗胃肠道疾病和治疗白内障方面也具有很好疗效。
　　西双版纳有着丰富的石斛资源，是我国石斛属种类分布最多的地区之一，有石斛43种、1变种［4］。近年来，在西双版纳地区建成了铁皮石斛规范化生产基地，并采用人工仿野生栽培石斛的技术，对石斛属类植物进行了规模化的人工种植，目前已成为石斛类产品的主要原料之一。另外，在西双版纳地区，金釵石斛被大量用作铁皮石斛的替代品，有关这几种石斛质量差异尚未见报道。本文从石斛多糖含量及折干率的角度，比较了因不同栽培类型及栽培环境导致的石斛品质的差异，为石斛的种植及应用提供理论依据。

　　1  材料与仪器

　　1.1  材料

　　铁皮石斛采集于2007-11-20，金釵石斛采集于2007-11-20，采样产地均为云南西双版纳。

　　1.2  试剂与仪器

　　苯酚、浓硫酸、无水乙醇、氯仿、正丁醇等均为分析纯。旋转蒸发器R-210(瑞士布奇)，TU-1901新世纪紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)，数显恒温水浴锅HH-4(常州国华电器有限公司)，GZX-9140恒温数显鼓风干燥箱(上海博讯设备有限公司)，METTLER TOLEDO分析天平AB135-S，PL203。

　　2  方法

　　2.1  折干率分别将新鲜采集的铁皮石斛样品（5种10份，勐海县)，金釵石斛样品（5种5份，勐海县，景洪市普文镇）晾干，切成小段（约1 cm），在恒温鼓风干燥箱中50℃干燥，称重，计算折干率。

　　2.2  线性关系精确称取在105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品100 mg，置100 ml量瓶中，用蒸馏水溶解、定容。精取10 ml于100 ml量瓶中，用蒸馏水定容即得。每1 ml溶液含葡萄糖0.1 mg。
   
　　精取葡萄糖对照液0.1，0.2 ，0.3， 0.4，0.5 ，0.6.，0.7 ml，分别置于量瓶中，加蒸馏水使成2.0 ml，各加苯酚试剂1.0 ml，在旋转混匀器上摇匀，迅速滴加浓硫酸5.0 ml，摇匀，放置5 min，置沸水浴中加热15 min，冷水迅速冷却至室温。另以蒸馏水2.0 ml同法操作，作为空白对照，在490 nm处测其吸光度。

密称取各石斛干燥后粗粉10 g ，加入石油醚（60～90℃）50 ml，回流提取1 h脱脂。过滤，挥干溶媒，以80％乙醇回流提取1 h（提取分离干扰组分），趁热过滤，挥干溶媒，加入蒸馏水250 ml回流提取2次，1 h/次，趁热过滤，减压浓缩至30 ml，用0.1％活性炭脱色，过滤，加入95％乙醇使溶液含醇80％，静置过夜，分出沉淀物溶于蒸馏水，Sevag法脱蛋白。上清液如上述醇沉，沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤。将沉淀再如上脱色、醇沉，得到多糖精制品于60℃烘干备用。

　　2.4  换算因素精确称取60℃干燥至恒重的石斛多糖精制品各10 mg，分别置于100 ml量瓶，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，作为储备液。分别精取多糖储备液0.3 ml，按照标准曲线制备的方法操作，测定吸收度。另精取葡萄糖标准溶液0.3ml（含葡萄糖30 μg），同法操作，求出石斛多糖溶液中的葡萄糖含量，按下式计算换算因素,F= 多糖浓度（μg·ml-1）/多糖溶液的葡萄糖含量（μg·ml-1）×稀释倍数。

　　2.5  样品多糖测定精密称取60℃恒重的各石斛粗粉0.5 g，置圆底烧瓶，用石油醚（60～90℃）脱脂1 h，加入80％乙醇100 ml回流提取1 h，趁热过滤。药渣用80％热乙醇8 ml洗涤3次，再用85 ml蒸馏水回流提取1 h，趁热过滤，用热水洗涤药渣和烧瓶，冷却后在250 ml量瓶中以水定容。分别精取0.3 ml，按标准曲线项下操作，按下式计算样品中多糖的含量。多糖含量（％）＝Cs·D·F·V/ W。式中：Cs为供试品溶液中葡萄糖浓度（μg·ml-1），D为供试品溶液的稀释因素，F为换算因素，V为供试品的体积（ml），W为供试品的质量（mg）。

　　3  结果

　　3.1  折干率铁皮石斛（两次采集）和金釵石斛的折干率见表1～2。表1  铁皮石斛折干率（略）表2  金釵石斛折干率（略）

　　3.2  线性关系与线性范围依据方法“2.2”项绘成标准曲线,得回归方程: Y=-0.001 47+ 0.074 45X，r=0.998 4,说明在5.00～35.00 μg间的线性较好。

　　3.3  换算因素石斛中多糖成分比较复杂,将其分解成单糖分子后再根据单糖的含量换算出石斛多糖的含量。根据实验数据计算出铁皮石斛及金釵石斛的换算因素F值见表3。表3  铁皮石斛及金釵石斛换算因素（略）

　　3.4  多糖含量采用硫酸-苯酚比色法测定石斛多糖的含量。每一种铁皮石斛及金釵石斛样品各取5个样品，分别编为1，2，3，4，5号，每个各取3份，对处理后的每份多糖供试液分别平行测定3次，取浓度的平均值计算多糖含量。结果见表4。表4  铁皮石斛及金釵石斛多糖含量（略）

　　4  结论

    有文献报道，铁皮石斛的多糖含量约为22%［6，7］。本实验中，冬末采收的铁皮石斛的多糖含量及折干率（20.29%，20.16%）高于秋末采收的铁皮石斛（14.86%，16.9%），因此选择冬末作为铁皮石斛的采收季节较为适宜。在相同栽培条件下，1号样品多糖含量（22.27%）与4号样品多糖含量（17.75%）的最大差值为4.52%，而1号样品折干率（22.1%） 与5号样品折干率（17.0%）之间最大差值5.1%，由此可推断，不同栽培类型铁皮石斛之间品质存在一定的差异。

    李满飞等［5］报道了用比色法测定石斛多糖时测定了金釵石斛，其多糖含量为2.．29％。本实验结果表明，金釵石斛中石斛碱含量明显大大高于铁皮石斛，而石斛多糖含量低于铁皮石斛，作为铁皮石斛替代品的金釵石斛的平均多糖含量及折干率（16.93%,18.92%）与铁皮石斛（20.29%，20.16%）差异不大，其野生苗的石斛碱和多糖含量及折干率（17.91%，19.26%）均高于组培苗（15.47%，18.4%），因此选择野生苗作为药用更为适宜。这也是为什么中药厂采购石斛多采购金釵石斛的原因了。面前西双版纳地区野生金钗还没有招到破坏性采摘，作为国家稀缺性二级保护植物，值得当地政府认真保护。

【参考文献】
  　［1］郁美娟,孟庆华，黄德音，等.石斛属植物有效成分及药理作用研究［J］.中草药,2003,25(11):918.
　　［2］林萍,毕志明，徐 红，等.石斛属植物药理活性研究进展［J］.中草药，2003，34（11）：19.
　　［3］张纪立,何锦丽.石斛药理研究进展［J］.时珍国医国药,2000,11(5):469.
　　［4］高江云.西双版纳石斛资源的保护利用［J］.园艺学报,1996,23(2):160.
　　［5］李满飞，徐国钧，平田义正，等.中药石斛类多糖的含量测定［J］.中草药,1990,21(10):10.
　　［6］黄民权，黄步汉，蔡体育，等．铁皮石斛多糖的提取、分离和分析［J］．中草药，1994，25(31)：128.
　　［7］李亚芳，张晓华，孙国明，等．石斛中总生物碱和多糖的含量测定［J］．中国药事，2002，16(7)：426.