LSCM是一种高科技显微镜；它是在荧光显微镜成象的基础上加装激光扫描装置，使用紫外光或可见光激发荧光探针，从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图像，成为形态学、分子细胞生物学、神经科学、药理学、遗传学等领域新一代强有力的研究工具。
在测试的时候很多人对LSCM这一检测仪器还有诸多不解，在上面我们谈到了它的应用，现在我们就来具体聊聊它的原理以及测试步骤吧
激光扫描共聚焦显微镜是一种高端显微镜技术，它通过激光沿三个方向进行扫描，利用共聚焦技术获取高分辨率三维图像。
激光扫描共聚焦显微镜的各组成部分的原理如下；
1激光光源；激光扫描共聚焦显微镜使用高能激光束作为光源，通常为蓝绿激光，単色性好，能够提供高强度。高方向性和高单色性的光束。
2物镜：激光束经过物镜后变成高质量的平面波，将样本上的荧光物质激发，造成荧光发射。
3 共焦平面；共焦平面是显微镜的关键组成部分，它是通过两个对称的反射镜形成的，可以将激光束和荧光信号在空间和时间上jingque对准。共焦平面允许只在一个特定区域（即焦点）内收集荧光信号，减少了背景信号的干扰，提高了信噪比。
4探测器：荧光信号被探测器收集并放大，最后通过计算机处理成高质量的二维或三维图像。
激光共聚焦显微镜的操作步骤：
1、根据荧光探针的激发与发射波长，选择合适的激光，激光功率，光谱滤光片和发射滤光片。
2、确定扫描的方法：点，线，面，3D扫描。
3、确定扫描的密度（分辨率）：分辨率越高，扫描的速度就越慢，图像的信噪比也越好，但可能会出现光漂白。
4、选择其物镜的倍数及电子放大倍率：确定完这个条件之后，在选择扫描的范围，物镜的透光率与数值孔径（NA）的四次方成正比，并且物镜放大倍数的平方。所以，反比例，应该尽量选择具有高数值孔径的物镜。
5、根据样品的制备质量，选择合适的针孔尺寸，调节激光管电压，光电倍增管功率，降噪等，达到zuijia状态。这些参数的选择或者设置十分紧密，都要全面考虑。
6、确定光线的切割范围，也就是扫描样品的厚度，起始位置以及结束位置。
7、给出了由光切割的层数和拍摄时的累积平均次数。
8、获取图像并保存。
激光共聚焦显微镜测试的样品要求：
生物样品：
1. 先在荧光显微镜下观察荧光表达是否正常，以确定是否有必要使用激光共聚焦；
2. 盖玻片厚度要求≤0.17mm；
3. 明确激发波长和发射波长；
4. 重构的需要明确扫描区域大小，位置，Z步进
5. 共聚焦要的标本一定要贴壁很好，不能悬浮起来，需要在载玻片上固定好后
6. 做显微成像，样品需要加抗荧光淬灭剂，盖玻片需要固定。